|
Szczegóły Produktu:
|
| Nazwa produktu: | Zestaw do szybkiego testu PCR w czasie rzeczywistym na wirus ospy małp | Wartość Ct: | 35 |
|---|---|---|---|
| Składowanie: | -20 ℃ ± 5 ℃ | Kanały wykrywania: | FAM |
| IC: | VIC | LOD: | 200 kopii/ml |
| High Light: | Monkeypox Virus PCR Rapid Test Kit,Monkeypox PCR Rapid Test Kit,Surowica Monkeypox Real Time PCR Kit |
||
Zestaw do szybkiego testu PCR w czasie rzeczywistym na wirusa Monkeypox
Przeznaczenie
Zestaw ten służy do jakościowego wykrywania kwasów nukleinowych in vitro wirusa ospy małp w surowicy ludzkiej, próbkach wysięku ze zmian chorobowych i wymazach.Wyniki testów tego zestawu służą wyłącznie jako odniesienie kliniczne i nie powinny być wykorzystywane jako jedyny standard w diagnozie klinicznej.
Ospa małp jest rzadką chorobą odzwierzęcą charakteryzującą się wykwitami skórnymi wywołanymi przez wirus ospy małp (MPV) i której objawy kliniczne są podobne do objawów ospy prawdziwej.Przenoszony głównie przez zwierzęta, ludzie mogą zarazić się małpią ospą poprzez ukąszenia zarażonych zwierząt lub bezpośredni kontakt z krwią, płynami i wysypką zakażonych zwierząt, a wirus może również przenosić się z człowieka na człowieka.
Specyfikacja
| Nazwa produktu | Zestaw PCR w czasie rzeczywistym wirusa ospy małp |
| Kanały wykrywania | FAM |
| IC | VIC |
| Wartość Ct | 35 |
| Granica wykrywalności | 200 kopii/ml |
| Magazynowanie | -20 ℃ ± 5 ℃ |
| Transport | W stanie zamrożonym |
| Okres trwałości | 12 miesięcy |
| Typ próbki | Wymazy z nosa, wymaz z jamy ustnej i gardła, ślina, mocz, zmiany chorobowe, wysięk i krew itp. |
| Pakiet | 24 testy/zestaw,48 testów/zestaw,96 testów/zestaw |
| składniki | Bufor reakcji PCR, mieszanina enzymów PCR, kontrola pozytywna, kontrola negatywna |
ZASADA TESTU
Zestaw ten wykorzystuje technologię fluorescencyjnego PCR w czasie rzeczywistym, która jest odpowiednia do wykrywania kwasów nukleinowych wirusa ospy małp wyekstrahowanego z próbek klinicznych, takich jak surowica ludzka, próbki wysięku ze zmian chorobowych i próbki wymazów. Każdy system reakcyjny zawiera specyficzne startery i sondy fluorescencyjne do wykrywania wirusa, a Kwas nukleinowy wirusa ospy małp można wykryć jakościowo przez zbieranie sygnału fluorescencyjnego generowanego przez amplifikację PCR.
Ponadto do każdego systemu reakcyjnego dodawane są specyficzne startery i sondy fluorescencyjne do kontroli wzorca wewnętrznego do wykrywania ludzkich próbek klinicznych, a proces pobierania, transportu i ekstrakcji mierzonej próbki jest monitorowany, co wskazuje na fałszywie ujemny wynik testu .
System Real-Time PCR: Molarray MA-6000, ABI 7500, ViiATM 7, QuantStudio 5, QuantStudio 6/7 pro, QuantStudio 6/7 flex, Agilent Mx3000P/3005P, Rotor-GeneTM 6000/Q, Bio-Rad CFX96 TouchTM/ iQTM 5,Hongshi SLAN-96S/96P, AGS8830, AGS4800.
SKŁADNIKI
| Specyfikacje | LQ-000301 24T |
LQ-000302 48T |
LQ-000303 96T |
| Bufor reakcji PCR | 336 μL × 1 tuba | 672 μL × 1 tuba | 672 μL × 2 tuba |
| Mieszanina enzymów PCR | 30 μL × 1 tuba | 50 μL × 1 tuba | 100 μL × 1 tuba |
| Kontrola pozytywna | 50 μL × 1 tuba | 100 μL × 1 tuba | 200 μL × 1 tuba |
| Negatywna kontrola | 50 μL × 1 tuba | 100 μL × 1 tuba | 200 μL × 1 tuba |
| Instrukcja użytkowania (szt.) | 1 | 1 | 1 |
PROCEDURY
1. Przykładowe preparaty
Ekstrakcja DNA z próbek klinicznych jest przeprowadzana zgodnie z odpowiednimi wymaganiami i procedurami zestawu do ekstrakcji DNA wirusa.Wydobyte
DNA może być bezpośrednio użyte do wykrywania.Jeśli próbka nie zostanie wykryta natychmiast po ekstrakcji, należy ją przechowywać w temperaturze -70°C w trybie gotowości, unikając powtarzających się cykli zamrażania-rozmrażania.
2. Przygotowanie systemu reakcji
(1) Przygotowanie systemu: Wyjmij odczynnik z zestawu i pozwól mu całkowicie rozmrozić się w temperaturze pokojowej.Odwróć mieszaninę i natychmiast odwiruj.N reakcji testowych (N = liczba badanych próbek + kontrola dodatnia + kontrola ujemna + 1) przygotowuje się odpowiednio dla systemów reakcyjnych w następujący sposób.
| składniki | Objętość dla 1 układu reakcyjnego | Objętość dla układu reakcyjnego N |
| Bufor do reakcji PCR | 14 μL | 14 μLx N |
| Mieszanina enzymów PCR | 1 μL | 1 μLx N |
| Maksymalna głośność | 15 μL | 15 μLx N |
(2) Dystrybucja w systemie reakcyjnym: Dobrze wymieszać powyższy bufor reakcyjny, odwirować i rozdzielić 15 μl porcji do probówek PCR odpowiednich do fluorescencyjnego instrumentu PCR.(Odwiruj probówki do PCR przy 6000 obr./min przez 30 s i przenieś do strefy obróbki próbki.)
3. Ładowanie próbki (strefa obróbki próbki)
Do powyższych probówek PCR dodać odpowiednio 10 μl próbki kwasu nukleinowego, kontrolę negatywną i kontrolę pozytywną.Zamknąć szczelnie probówki i wirować przy 6000 obr./min przez 10 s, a następnie przetransportować do strefy amplifikacji PCR.
* Środki ostrożności: Dodawanie próbek w następującej kolejności to
zalecane: kontrola negatywna -> próbka kwasu nukleinowego -> kontrola pozytywna.
4. Amplifikacja PCR (strefa amplifikacji PCR)
4.1 Umieść zamknięte probówki PCR w maszynie do PCR w czasie rzeczywistym w celu amplifikacji.
4.2 Ustawienie warunków cyklu fluorescencyjnego PCR
| Program | Temperatura | Czas trwania reakcji | Liczba cykli |
|
1 |
50°C | 2 min | 1 |
| 2 | 95°C | 2s | 1 |
| 3 | 95°C | 1s | 41 |
| 60°C | 13s/20s/35s |
Zbierz sygnały fluorescencyjne w kroku 3:60 ℃;35s dla ABI 7500, 20s dla SLAN-96S/96P, natomiast 13s dla innych systemów Real-Time PCR.Całkowita objętość: 25 μL.
4.3 Utylizacja po wykryciu
Po zakończeniu reakcji probówki do PCR należy wyrzucić do szczelnie zamkniętego worka, a zużyte probówki traktować jak odpady medyczne.
5. Ustawienia analizy wyników
Ustaw linię bazową w regionie przed amplifikacją wykładniczą, gdzie sygnały fluorescencyjne wszystkich próbek są względnie stabilne (brak znaczących fluktuacji we wszystkich próbkach);ustawić punkt początkowy (numer cyklu) z dala od wahań sygnału na początku
faza zbierania fluorescencji;ustaw punkt końcowy (numer cyklu) 1~3 cykle przed Ct pierwszej próbki, aby wprowadzić wzmocnienie wykładnicze.Zalecane jest 4~15 cykli.
Ustaw próg tuż nad najwyższym punktem krzywej wzmocnienia kontroli ujemnej (krzywa nieregularnego szumu).
6. Kryteria kontroli jakości
Przed oceną wyników próbki należy zinterpretować kontrolę dodatnią i kontrolę ujemną przy użyciu poniższej tabeli interpretacji, a krzywą kontroli dodatniej i kontroli ujemnej należy wykonać prawidłowo, w przeciwnym razie wynik próbki jest nieważny.
| Kanały/ Sterownica |
Wartość progu cyklu (Ct) | |
| FAM | VIC | |
| Kontrola pozytywna | Ct > 40 lub UNDET | Ct > 40 lub UNDET |
| Negatywna kontrola | Ct ≤ 35 | Ct ≤ 35 |
7. Interpretacja wyników testu
Kanały FAM dla wirusa Monkeypox, wynik wykrywania należy interpretować jak poniżej.
a) Dodatni: Ct ≤ 38, a krzywa amplifikacji ma kształt litery S.
b) Podejrzewa się: 38 < Ct ≤ 40 i krzywa amplifikacji ma kształt litery S, potrzebny jest drugi test.Uznać za pozytywny, jeśli Ct ≤ 40 i krzywa amplifikacji ma kształt litery S dla drugiego testu.Uznawany za ujemny, jeśli Ct > 40 lub zero Ct i Ct ≤ 35 w kanale VIC w drugim teście.
c) Ujemny: Ct > 40 lub zero Ct i Ct ≤ 35 w kanale VIC.
d) Ponowny test: Ct > 40 lub zero Ct i Ct > 35 w kanale VIC.
Osoba kontaktowa: Ld
Tel: +8613480985156
